实验概要本实验介绍了检测病毒滴度的方法。咯悝滩镞实验原理根据噬菌斑数计算病毒滴度。
工具/原料
1.4%agarosegel:2gagrose50ml水,高压灭菌
2×Grace(unsupplemented):9.14g粉末(坡纠课柩invitrogen)0.07gNaHCO3H2O,调PH6.1,定容至100ml,无菌过滤
supplementedGrace:1牯拚珈嗄×Grace添加3.33mg/mlLactalbumin,3.33mg/mlyeastolate,无菌过滤
4.高温灭活FBS
主要设备1.6孔板2.12ml离心管3.100ml无菌玻璃瓶4.无菌吸管5.70℃水浴锅
实验材料杆状病毒,SF9:5×105cells/ml
方法/步骤
1、无菌条件下,2ml/孔细胞(5×105cells/ml)种入6孔板,室温孵育1h使其贴壁,孵育后镜检其贴壁程度;
2、将4%agarosegel放入70℃水浴锅融解,空100ml无菌瓶与2×Grace放入40℃水浴锅预热;
3、将杆状病毒用无血清supplementedGrace梯度稀释:10-1~10-8。
4、弃6孔板内上清,快速加入稀释好的病毒,1ml/孔,复孔,室温孵育1h。
5、配置上层琼脂:加20ml高温灭活FBS到2×Grace100ml,25ml2×Grace钱砀渝测(含FBS)12.5罪焐芡拂ml无菌水12.5ml4%agarosegel,至预热的100ml无菌瓶,轻轻混匀,放入37℃水浴锅备用;
6、弃6孔板内上清,快速加2ml上层琼脂,以防菌层干燥,静置10-20min使其凝固;
7、将6孔板放入27℃培养箱,培养4-10天;
8、计数板中噬菌斑,直至连续两天无变化,加1mg/ml中性红0.5ml,室温孵育2h后计数噬菌斑。