最近小编收到很多问题,其中一个就是下面小编为大家整理一下关于IPTG诱导pET重组子的表达过程的步骤,希望这些方法能够帮助到大家。
工具/原料
电脑
方法/步骤
1、首先,将含有pET28c(+)重组子的BL21菌落接种于2ml含卡那霉素的LB培养基中,在37摄氏度下振荡培养过夜。
2、然后,分别取100微升的培养液于5ml含卡那霉素的LB培养基中,在30摄氏度2廴类锾渭00-300r/min振荡培养2-3小时,直至OD600达0.4-0.6.
3、然后,取出1.0ml样品作为IPTG诱导前的样品,在-20摄氏度下保存,其余的皱诣愚继样品中添加12-40微升的100mmol/L的IPTG诱导后的样品,在37摄氏度下振荡培养。
4、然后,分别在4小时后取出1.0ml样品作为IPTG诱导后的样品,在-20摄氏度下保存。
5、然后,将IPTG诱导前样品与诱导后的样品在5000r/min下离心五分钟,分别回收菌体的沉淀。
6、最后,在沉淀样品中分别加入用200微升冰预冷的磷酸缓冲液悬浮细菌,洗涤后在5000r/min下离心五分钟,然后再回收菌体。