细胞周期(ce盟敢势袂llcycle)是细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,包括细胞分裂间期与分裂期两个阶段。了解细胞周期变化对于了解药物抑制肿瘤于哪个时期具有重要意义。
工具/原料
细胞70%乙醇PI染液流式细胞仪离心机等
1.步骤:
1、离心并收集细胞,弃上清,用预冷的PBS清洗细胞两次。
2、加入70%乙醇,于4℃固定过夜,或-20℃保存(一般来讲1个月内都是没有问题的)。
3、离心收及细胞,以1mL的绯摺驼予PBS清洗一次,加入500uLPBS(含50ug/mL的PI),100ug/mLRNaseA,0.2%TritonX-100)。
4、4℃避光孵育30min。
5、用流式细胞仪检测,一般计数2-3万个。
6、用细胞周期拟合ModFit软件分析
2.要点
1、分析时,使用FL2-W和FL2-A显示,去除联体细胞。
2、变异系数(CV)越小,峰形越好,越尖锐,能控制在5%左右最好,一般小于10%就可以了。
3、一般用400目筛网将黏在一起的细胞团滤掉,否则可能出现人为的多倍体干扰。
4、RNAse降解RNA,这样才能以荧光强度反映DNA的含量。