通过核酸染料PI标记DNA,并由流式细胞仪进行分析,可谀薜频扰得到细胞各个时期的分布状态,计算出G0/G1%,S%及G2/M/%,由此可以了解细胞的增殖能力,在抗肿瘤研究中,S期细胞比螟苋镔柞率通常作为判断肿瘤增殖状态的指标。
工具/原料
PI染液PBS胰酶DMEM
流式细胞仪离心机
方法/步骤
1、收集6孔板中的培养液于离心管中,1000rpm/min,离心10分钟,真空泵抽走上清液。
2、加入含EDTA的胰酶进行消化,待消化ok后,加入含10%FBS的DMEM终止消化,轻轻吹打细胞,将细胞悬液收集到离心管中。1000rpm/min,离心10分钟,真空泵抽走上清液。
3、逐滴加入5ml或更多预冷的70-80%的乙醇,涡旋以混匀细胞,4°C避光过夜(>18小时)。若长期保存,将固定的细胞放于-20°C.
4、1000-1500rpm/min,离心细胞10分钟,弃上清。之后清洗细胞2次以去除所有的乙醇。注:第一次用1xPBS,第二次用染色液。
5、5.细胞染薄本窭煌色:每管样本需10^6细胞。具体操作如下:A.对于PI/RNase染色,将细胞重悬于0.5mLPI/RNase染色液。B对于7-AAD染色,将峙僮侯劝细胞重悬于0.1mL染色液,同时加入20μL7-AAD染色液。
6、室温避光孵育15分钟。
7、分析前4°C避光保存样本,1小时之内上流式细胞仪检测。